不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長。
不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長。
不需要，珠海愷瑞開發(fā)的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基系列均不需要提前預(yù)熱，4℃冰箱中取出即可直接使用，不會對細(xì)胞造成損害導(dǎo)致大面積死亡。
珠海愷瑞開發(fā)的無血清化學(xué)限定培養(yǎng)液采用自主研發(fā)配方，且不含抗結(jié)團(tuán)劑及其它蛋白添加因子，所提供的細(xì)胞生長環(huán)境與其它品牌產(chǎn)品明顯不同，因此在更換培養(yǎng)液時細(xì)胞容易出現(xiàn)短暫的不適應(yīng)現(xiàn)象。用戶在更換使用珠海愷瑞培養(yǎng)液時若出現(xiàn)上述現(xiàn)象，可將新、舊培養(yǎng)液混合后使用并逐步減低原來培養(yǎng)液體積比例，待細(xì)胞完全過渡到新培養(yǎng)液后，讓細(xì)胞在新的培養(yǎng)液中持續(xù)傳代數(shù)周時間，等細(xì)胞的生長速度及密度恢復(fù)至正常狀態(tài)再做下一步的實驗。在此期間，我們會安排技術(shù)人員及時解答用戶所遇到的問題，確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)時需要注意選擇細(xì)胞的傳代接種密度、傳代時機(jī)以及密切關(guān)注細(xì)胞活率等事項。以珠海愷瑞馴化篩選的HEK293為例，此細(xì)胞生長周期為9~10天，傳代時細(xì)胞接種密度為0.3~0.5×106個/毫升，細(xì)胞傳代最佳時期是細(xì)胞正處于指數(shù)增長期，此時細(xì)胞活率應(yīng)在98%以上，細(xì)胞密度為4~6×106個/毫升（即培養(yǎng)三到四天進(jìn)行傳代）。傳代培養(yǎng)過程中要密切注意細(xì)胞的活率狀態(tài)，若活率下降，需先檢查各個培養(yǎng)條件是否發(fā)生了變化，若無，則對細(xì)胞進(jìn)行離心處理，在小體積搖瓶中傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行下一步實驗。
進(jìn)行細(xì)胞種子保存時，請按說明書中推薦的細(xì)胞凍存密度將細(xì)胞離心，再加入珠海愷瑞自主研發(fā)的無血清細(xì)胞凍存液，而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。細(xì)胞復(fù)蘇時不需要對融化后的細(xì)胞進(jìn)行離心除去細(xì)胞凍存液這一步操作，直接將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小體積搖瓶進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，待細(xì)胞恢復(fù)三至四天后進(jìn)行傳代，細(xì)胞活率恢復(fù)后再進(jìn)行后續(xù)實驗，避免造成對后續(xù)實驗的影響。
因為不同來源的腺病毒的MOI值不同，所以在正式實驗前，可進(jìn)行最佳MOI值的摸索，設(shè)計預(yù)實驗以確定細(xì)胞中加入的病毒數(shù)（MOI值的摸索可參照珠海愷瑞《腺病毒擴(kuò)增系統(tǒng)操作指南》）
病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后的收樣時間因細(xì)胞來源不同而略有差異。經(jīng)多次用珠海愷瑞所優(yōu)化的HEK293細(xì)胞進(jìn)行實驗測試，病毒的感染時間為48h所產(chǎn)生的腺病毒滴度最高，過長的感染時間會導(dǎo)致滴度降低。
通常情況下細(xì)胞轉(zhuǎn)染之后活率不會有太大的降低，若出現(xiàn)細(xì)胞活率急劇下降，首先檢查培養(yǎng)條件是否有誤，其次需檢查所使用的轉(zhuǎn)染試劑量是否過量，過量的轉(zhuǎn)染試劑或者轉(zhuǎn)染復(fù)合物都會導(dǎo)致活率下降。
經(jīng)多次驗證，使用珠海愷瑞的293細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，其最佳收樣時間為轉(zhuǎn)染后的第六天，但由于用戶表達(dá)的蛋白大小及性質(zhì)不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染后存活時間長短不一，因此收樣時間應(yīng)視情況而定，建議收樣時細(xì)胞活率不要低于70%。
不需要，珠海愷瑞開發(fā)的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基系列均不需要提前預(yù)熱，4℃冰箱中取出即可直接使用，不會對細(xì)胞造成損害導(dǎo)致大面積死亡。
不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長。
珠海愷瑞開發(fā)的無血清化學(xué)限定培養(yǎng)液采用自主研發(fā)配方，且不含抗結(jié)團(tuán)劑及其它添加因子，所提供的細(xì)胞生長環(huán)境與其它產(chǎn)品明顯不同，因此在更換培養(yǎng)液時細(xì)胞容易出現(xiàn)短暫的不適應(yīng)現(xiàn)象。用戶在更換培養(yǎng)液時若出現(xiàn)細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，可在培養(yǎng)液中添加適量抗結(jié)團(tuán)劑（如硫酸葡聚糖）以消除細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象。若出現(xiàn)細(xì)胞生長速度減緩等其它現(xiàn)象，可將新、舊培養(yǎng)液混合使用并逐步減低原來培養(yǎng)液體積比例，待完全過渡到新培養(yǎng)液后，讓細(xì)胞在新的培養(yǎng)液中持續(xù)傳代數(shù)周時間以后再進(jìn)行蛋白表達(dá)實驗。在此期間，我們會安排技術(shù)人員及時解答用戶所遇到的問題，確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功。
以珠海愷瑞馴化篩選的CHO-K1為例，該細(xì)胞生長周期為9~10天，傳代時，細(xì)胞接種密度為0.3×106個/毫升，細(xì)胞傳代最佳時機(jī)是細(xì)胞正處于指數(shù)增長期，此時細(xì)胞活率應(yīng)在98%以上，細(xì)胞密度在4~6×106個/毫升（即培養(yǎng)三到四天進(jìn)行傳代）。
傳代培養(yǎng)過程中要密切注意細(xì)胞的活率狀態(tài)，若活率下降，需先檢查各個培養(yǎng)條件是否發(fā)生了變化，若無，則對細(xì)胞進(jìn)行離心處理，在小規(guī)格搖瓶中傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行下一步實驗。
進(jìn)行細(xì)胞種子保存時，請按說明書中推薦的細(xì)胞凍存密度將細(xì)胞離心，再加入珠海愷瑞自主研發(fā)的無血清細(xì)胞凍存液，而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。細(xì)胞復(fù)蘇時不需要對融化后的細(xì)胞進(jìn)行離心除去細(xì)胞凍存液這一步操作，直接將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小規(guī)格搖瓶進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，待細(xì)胞恢復(fù)三至四天后進(jìn)行傳代，細(xì)胞活率恢復(fù)后再進(jìn)行后續(xù)實驗，避免造成對后續(xù)實驗的影響。
因本系統(tǒng)使用的方法為高細(xì)胞密度轉(zhuǎn)染，在20×106個/ml密度條件下培養(yǎng)可能會出現(xiàn)輕微掛壁情況，這屬于正常情況，可繼續(xù)進(jìn)行下一步操作。
若轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)松散的細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，可能是細(xì)胞成團(tuán)粘附于瓶壁上并在震動中脫落下來所致，這種情況多數(shù)是搖瓶本身不干凈或細(xì)胞存活率低而引起。在轉(zhuǎn)染后，若轉(zhuǎn)染后細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象比較嚴(yán)重，可在轉(zhuǎn)染1天后加入適量抗結(jié)團(tuán)劑（例如25mg/L左右的硫酸葡聚糖），以緩解或消除細(xì)胞結(jié)團(tuán)。
多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第7天左右可達(dá)到最高值，通常收樣時間可選擇在轉(zhuǎn)染后的第6-7天，具體收樣時間可根據(jù)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞活率來確定，一般建議在細(xì)胞活率大于70%時收樣。
雜交瘤細(xì)胞一般可以直接從靜置培養(yǎng)轉(zhuǎn)換到搖瓶懸浮震蕩培養(yǎng)，在此過程中細(xì)胞需要先通過靜置培養(yǎng)逐級擴(kuò)增，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量較多時再進(jìn)行懸浮震蕩培養(yǎng)。細(xì)胞接種到搖瓶時請將培養(yǎng)液切換成KD-Hybri，此時培養(yǎng)基血清含量可降至2%。
進(jìn)行無血清馴化時必須保證細(xì)胞狀態(tài)良好，細(xì)胞活率在85%以上時方可進(jìn)行。切換成無血清培養(yǎng)后細(xì)胞一開始活率下降是細(xì)胞正在適應(yīng)無血清環(huán)境的正常現(xiàn)象，此時需重點監(jiān)測細(xì)胞后續(xù)是否有增殖、活率是否在逐漸回升。若細(xì)胞活率低于50%應(yīng)補(bǔ)回2%血清，傳代2-3代，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行無血清馴化。
雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定性較差，無血清持續(xù)馴化過程中可能會引起陽性細(xì)胞丟失，若遇到這種情況可通過對細(xì)胞進(jìn)行多次單克隆以提高其陽性特性。
細(xì)胞傳代要及時并選擇對數(shù)生長期進(jìn)行傳代。不同克隆的雜交瘤細(xì)胞生長速率不同，對無血清培養(yǎng)系統(tǒng)適應(yīng)能力不同，最高生長密度也會有不同。
