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發(fā)布時間：2020-12-07 瀏覽次數(shù)：3
雜交瘤細胞無血清培養(yǎng)馴化
KD-Hybri-Kit
珠海愷瑞生物
KD-Hybri-Kit為雜交瘤細胞高密度懸浮無血清培養(yǎng)系統(tǒng)，可用于雜交瘤單抗搖瓶或生物反應(yīng)器生產(chǎn)。該系統(tǒng)不僅能大幅度提高抗體表達效率，還能 徹底避免單抗制備過程中血清或其他動物來源成分的污染風險。
在進行雜交瘤的無血清高密度懸浮培養(yǎng)之前，多數(shù)細胞往往需要進行無血清培養(yǎng)條件的馴化，此過程可通過使用KD-Hybri培養(yǎng)液將培養(yǎng)在KTM2培養(yǎng)液中的細胞逐步降血清培養(yǎng)來完成。KTM2是化學限定無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)液，可用于小鼠雜交瘤細胞制備中的前期融合、篩選以及雜交瘤細胞在孔板和方瓶中的擴增培養(yǎng)。
1. 經(jīng)過ELISA檢測與細胞單克隆，所篩選的雜交瘤細胞擴增至含5%FBS血清KTM2或其它培養(yǎng)液的T75方瓶中靜置培養(yǎng)，每天觀察細胞活率及密度；
2. 細胞經(jīng)過一周三次換液的靜置培養(yǎng)，細胞匯合度達到80%以上時，將方瓶內(nèi)的培養(yǎng)液置換成含5%FBS的KD-Hybri培養(yǎng)液培養(yǎng)一代，目的是讓細胞提前適應(yīng)在KD-Hybri培養(yǎng)液里擴增；
3. 隨后將方瓶中約90%細胞轉(zhuǎn)移至250ml搖瓶進行逐級降血清懸浮培養(yǎng)（培養(yǎng)體積為搖瓶容積的1/5）。補充含5%FBS新鮮的KTM2培養(yǎng)液于方瓶中繼續(xù)培養(yǎng)剩余約10%細胞，用于細胞保種；
4. 搖瓶逐級降血清的過程一般為5%FBS→2.5%FBS→無血清。從5%FBS降至2.5%FBS血清時，吸走25mL培養(yǎng)液及細胞，補充25mL不含血清的新鮮KD-Hybri培養(yǎng)液，使血清濃度降為原來的一半；
5. 完成2.5%FBS培養(yǎng)后，將細胞全部轉(zhuǎn)移至50ml離心管，1000rpm離心5min，再用新鮮KD-Hybri培養(yǎng)液重懸細胞，將細胞稀釋至1.0×10^6個/ml，接種至250ml搖瓶中進行無血清培養(yǎng)；
6. 完成馴化無血清培養(yǎng)后，選擇對數(shù)生長期（1.5-3.5×10^6個/ml）的細胞進行傳代，以密度為0.5×10^6個/ml接種，每隔三天傳代一次。
原文鏈接：https://mp.weixin.qq.com/s/BB8oGr_0ApVV1pqpXhLxyA
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